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核酸检测法之核酸隔离采样工作站

  • 发布日期:2020-10-12      浏览次数:28
    • 核酸检测法之核酸隔离采样工作站

       LB-3315型双人移动式核酸隔离箱

       

      HIV核酸定性检测

      1.1 方法和试剂

      1.1.1 方法

      (1)检测方法为商品化试剂盒和实验室自建方法,商品化试剂应严格按说明书操作。下面介绍的方法是实验室自建方法,供参考。

      (2)检测血浆或血清样品使用逆转录PCR(RT-PCR)方法,建议轮PCR扩增使用RT-PCR一步法;检测血细胞或组织样品使用PCR方法。一般使用扩增两轮的套式PCR方法。

      (3)设立阳性、阴性及空白对照。阳性对照为与待测样品同质、含有目的基因的样品;阴性对照为与待测样品同质、不含有目的基因的样品。阳性和阴性对照样品应与待检样品处理程序一致。阴性对照的设置数量应根据实验样品的数量设置在不同的位置。

      1.1.2 试剂

      (1)PCR引物:一般使用扩增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。进行RNA逆转录时可使用下游特异性引物或随机引物。引物设计可参考文献或自行设计,应尽量涵盖常见的HIV流行毒株,也可使用兼并性引物。

      (2)主要试剂:包括核酸提取纯化、逆转录、PCR所需的试剂。使用商品化核酸提取纯化试剂、逆转录酶反应试剂和PCR扩增试剂。

      (3)抗污染试剂:实验室自建检测方法可使用抗污染试剂,参考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。

      1.2 扩增目的基因片段

      1.2.1 样品的采集和处理

      1.2.2 核酸提取

     
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